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本制品是一种长波的核黄染料，通常和退行性示踪标志染料真蓝做神经元的双色标记。在神经元细胞中，核黄优先染色细胞核为黄色荧光，而真蓝作为一种紫外激发光激发的二价阳离子染料可以染色细胞质为蓝色荧光。两种染料在免疫组织化学应用中的表现都非常稳定，可以用于和DAB染料的联合应用。当Hoechst33258、Hoechst33342和核黄(Hoechst S769121)通过轴突逆行运输到母细胞体后，可能会迁出轴突和母细胞体，因此可以作为毗邻神经胶质细胞细胞核的荧光染料。这种迁出现象在体内和体外的研究中，当您将切片保存于水性环境下，都有发现。使用1%示踪剂时，活体内的迁出现象可以通过限制动物的生存时间而加以控制。体外的迁出现象可以通过材料组织的快速处理来避免。

Hoechst系列染料是一类可用于应用于荧光显微镜和流式细胞术分析的标记DNA的荧光家族染料。因其可以标记DNA，所以这类染料被广泛的应用于细胞核和线粒体的可视化定位。Hoechst33258和Hoechst33342作为类二苯甲亚胺的染料，是其中最广泛应用的核酸染料。这两种染料都可以被350nm左右的紫外光激发，发射461nm左右的蓝紫色荧光。Hoechst染料可以用于固定或者活细胞染色，也通常被用于另一种核酸染料的替代物，DAPI。他们之间重要的区别在于Hoechst33342的乙基可以使其更具有亲脂性，因此更易于穿过细胞膜。在一些应用中，Hoechst33258相比Hoechst33342表现出较差的膜透性。这类染料也常被用于检测样本DNA的含量，只需要设置一个荧光强度-DNA含量之间的标准曲线即可。

1. 样本准备：
   
   1. 悬浮细胞：离心收集细胞。以合适的缓冲液或不含血清酚红的培养基重悬细胞，建议pH7.4。
      
   2. 贴壁细胞：准备盖玻片上贴壁细胞原位染色，或者在细胞培养孔板中操作。
2. 添加Hoechst S769121至终浓度0.5～5μM。
   
3. 避光孵育细胞15～60min。
   注意：孵育时间和染料浓度需要根据实验条件进一步摸索优化。在初始实验中建议设计几个染料浓度进行摸索。
   
4. 荧光显微镜观察。